CONTEXTO

Recientemente se ha detectado una sintomatología en la que se observan chancros en tallos y ramas que provocan la seca e incluso la muerte regresiva de ramas y cuyos patógenos son desconocidos “Nuevas enfermedades causantes de chancros en olivar”. Si identificamos los agentes causales y diagnosticamos la enfermedad será más fácil poder combatirla y limitar su impacto.

OBJETIVOS

• Diseñar protocolos de aislamiento específicos para estos hongos desconocidos a partir de material vegetal afectado.
• Implementar una herramienta de diagnóstico para la identificación de hongos causantes de chancros optimizando técnicas moleculares mediante amplificación por PCR y secuenciación de los fitopatógenos responsables de la enfermedad.

METODOLOGÍA

Los diferentes hongos causantes de chancros se aislaron a partir de material vegetal infectado, sembrando fragmentos de este material vegetal en medio de cultivo suplementado con antibióticos para evitar crecimiento bacteriano. Cuando aparecieron evidencias de crecimiento fúngico, se aislaron los diferentes hongos purificando sus cultivos.

Posteriormente, se procedió a la extracción de ADN de estos cultivos puros mediante kit comercial (siguiendo instrucciones del fabricante), se amplificaron mediante PCR del espaciador transcrito interno del ribosoma (ITS1-4) y se secuenciaron mediante secuenciación Sanger.

Una vez obtenidas las secuencias, procedimos a su análisis bioinformático mediante la alineación de dichas secuencias y su comparación con las secuencias de nucleótidos de la región ITS1-4 disponibles en la base de datos del National Center for Biotechnology Information (NCBI), obteniendo así la identificación genética de cada uno de los hongos causantes de estos chancros.

RESULTADOS

• Se realizaron un total de 25 aislados de hongos procedentes de material vegetal afectado.
• Las cepas identificadas corresponden a los géneros Comoclathris y Alternaria destacando la presencia de las especies Comoclathris incompta (también conocida como Pleospora incompta) y Alternaria alternata, siendo este último el hongo mayoritario entre los aislados. También se identificaron las especies Eutypa lata, Schizophyllum commune y Stemphylium vesicarium.
• De la mayoría de estos hongos encontramos antecedentes bibliográficos de su patogenicidad en olivar.

CONCLUSIONES

1. Los hongos aislados en este estudio son los causantes de la nueva enfermedad. Y el procedimiento descrito en este trabajo es válido para la identificación genética de fitopatógenos.
2. La utilización de las técnicas moleculares descritas nos proporciona mayor precisión en la identificación de patógenos y evita errores de diagnóstico y procedimiento.
3. La identificación genética de estos hongos nos permite realizar estudios epidemiológicos que nos ayuden a conocer la incidencia de enfermedades hasta ahora poco conocidas.
4. El conocimiento de estos fitopatógenos es la base para diseñar nuevas terapias más eficaces y sostenibles para combatir enfermedades que minimizan la capacidad productiva del olivar y la calidad del aceite de oliva.